产品概述
加强型RIPA裂解液加强型对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用，是常用的细胞组织快速裂解液。使用加强型RIPA 裂解液特别适于提取膜蛋白以及western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。
产品/组分信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
Enhanced RIPA Lysis Buffer 加强型RIPA裂解液 | P121001 | 100ml |
运输：常温
保存：4℃保存一年
制备细胞裂解产物：
1. 800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；
2. 每50-100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250-500 ml）,冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
3. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物：
1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；
2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；
3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
4. 12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5. 假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
6. 20％的甘油保存于 -70oC 或-20oC。
注意事项：
1. 在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
3. 在该RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂。