RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液

产品概述

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解缓冲液制备用于Western特别是用

于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，也适用于大部分抗原表位检测，特别是免疫共沉淀等实验。

产品/组分信息

成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

运输：常温

保存：4℃保存一年

制备细胞裂解产物：

1.    800g   4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；

2.    每50～100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250~500 ml）,冰浴放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

3.    12000g   4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤3。

制备组织裂解产物：

1.    取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2.    加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；

3.    4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

4.    12000g   4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。

注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤4。

产品说明：

1.    转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2.    在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白提取，避免某些不稳定蛋白的降解；

3.    RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择添加。