转染实验常见问题

2025-01-04
1.没有生成高效率的DNA转染试剂复合物


没有生成高效复合物的因素有很多。首先,可能是没有选对合适的转染试剂。挑选转染试剂时应考虑基因的种类及分子量等因素。其次,有的转染试剂对血清的影响很大,应在无血清情况下进行转染。使用金传科技的Golden Tran系列转染试剂无需考虑血清对转染体系的影响,可在含血清培养基中进行转染。


2转染效率低


影响细胞转染效率的因素有很多。首先,与所转染细胞有关,有的细胞容易转染,如HeLa、B16F10、293T等。有的细胞不易转染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,与转染试剂的用量及与DNA的比例有关,在最佳的转染比例附近可以达到最佳的转染效果。最后,没有使用最适宜的细胞密度,应根据各种转染试剂的说明书中推荐的细胞密度进行细胞接种,更有利于提高转染效率。


3.使用错误的转染操作步骤


无论使用哪一款基因转染试剂,都应严格按照该转染试剂的说明书进行操作,其中包括转染试剂的用量、基因用量、最佳转染比例、孵育时间、检测时间等重要因素。


4.细胞毒性大


导致转染时细胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量过大、转染试剂的用量过大、转染时细胞状态较差以及培养基中抗生素的加入等。建议严格按照所选择转染试剂的说明书进行操作,以避免细胞毒性大的问题。


5.转染效果不稳定,不能重现


转染效果不稳定一般与两个因素紧密相关,一个是转染试剂的稳定性,另一个是基因的稳定性。转染试剂应按照说明书建议的保存温度及条件进行保存。如使用脂质体类的转染试剂,则不建议反复冻融,会引起该转染试剂结构上的变化。基因如短时间内连续使用,可放置于4℃保存。若超过10天不使用,建议置于-20℃或-80℃长期储存以降低核酸的降解速度。



分享